人肝間充質干細胞
人肝間充質干細胞，是分離自成人肝臟組織（主要為肝小葉間質、門靜脈周圍）的原代貼壁干細胞，是肝臟間質中核心的多能干細胞。該細胞經(jīng)體外分離、純化及鑒定，CD44、CD90、CD105免疫熒光/流式染色驗證陽性，CD34、CD45染色陰性，通過嚴格無菌檢測（無支原體、細菌、真菌及病毒污染），采用早期代次凍存，具備穩(wěn)定的體外培養(yǎng)特性及多向分化潛能。作為肝臟組織中的關鍵干細胞，其核心功能是維持肝臟組織穩(wěn)態(tài)、參與肝臟損傷修復、調節(jié)肝臟免疫應答，可分化為肝細胞樣細胞、膽管上皮樣細胞及脂肪細胞、成骨細胞等，在肝纖維化、肝硬化、肝損傷修復、肝臟疾病機制研究及細胞治療相關研究中具有關鍵地位，是探索肝臟病理機制、篩選靶向藥物及細胞治療研發(fā)的重要細胞模型，適用于免疫印跡、免疫熒光、流式細胞術、Transwell、誘導分化實驗、ELISA等多種實驗技術，廣泛應用于臨床醫(yī)學、肝病學、藥理學、細胞生物學等科研領域。
細胞特性
該細胞具有明確的干細胞表型及功能特征，核心特性如下：細胞形態(tài)典型，呈梭形或紡錘形，為嚴格貼壁生長，胞體均勻、透亮、突起明顯，匯合后呈平行排列的漩渦狀單層，符合間充質干細胞的典型形態(tài)特征；細胞特異性表達間充質干細胞表面標志物CD44、CD90、CD105，陽性率≥95%，不表達造血干細胞標志物CD34、CD45及上皮細胞標志物，經(jīng)免疫熒光、流式細胞術驗證，標志物表達穩(wěn)定，可特異性區(qū)分于其他肝臟細胞類型；細胞純度≥95%，無肝細胞、膽管細胞、造血細胞污染，無支原體、細菌、真菌及病毒污染，細胞活性≥90%，每瓶凍存細胞數(shù)≥1×10?個，可穩(wěn)定傳代至5-8代，早期代次（P2-P4）增殖能力及分化潛能保持zui'jia；細胞具備強大的多向分化潛能，在特定誘導條件下可分化為肝細胞樣細胞（表達白蛋白、細胞色素P450等）、膽管上皮樣細胞，也可分化為脂肪細胞、成骨細胞等間充質來源細胞；細胞具備免疫調節(jié)功能，可分泌多種抗炎因子及生長因子，抑制免疫細胞過度活化，參與肝臟免疫微環(huán)境調控；細胞為貼壁依賴性生長，適配常規(guī)間充質干細胞培養(yǎng)體系，推薦使用明膠或纖維連接蛋白包被以增強貼壁與增殖能力，培養(yǎng)過程中可穩(wěn)定維持干細胞表型與多向分化潛能。
產(chǎn)品特點
本產(chǎn)品具有活性高、純度高、特異性強、穩(wěn)定性好、分化潛能強、適用性廣、操作便捷等核心特點。細胞經(jīng)嚴格組織消化、密度梯度離心及差速貼壁法純化，純度≥95%，活性≥90%，細胞形態(tài)完整、突起清晰，可直接用于實驗，無需額外純化或誘導，降低實驗門檻；細胞特異性ji強，精準來源于肝臟組織，保留該細胞te有的表型、增殖能力及多向分化潛能，能有效模擬肝臟間質干細胞在生理及病理狀態(tài)下的反應，區(qū)別于骨髓、 adipose等其他來源的間充質干細胞，保障實驗的特異性與準確性；細胞生理功能穩(wěn)定，早期代次凍存，傳代過程中細胞形態(tài)、增殖能力、標志物表達及分化潛能無明顯衰退，能穩(wěn)定提供高活性原代干細胞模型，保障實驗數(shù)據(jù)的重復性與可靠性；適配常規(guī)間充質干細胞培養(yǎng)體系，培養(yǎng)條件溫和，操作流程簡潔，無需復雜實驗設備，適配各類基礎及轉化醫(yī)學實驗室使用；細胞無支原體、細菌、真菌污染，質檢嚴格，可直接用于后續(xù)干細胞功能研究、誘導分化實驗、藥物篩選、細胞治療相關研究等各類實驗，減少實驗污染風險，保障實驗順利進行；適用范圍覆蓋肝病學、藥理學、免疫學、細胞生物學、再生醫(yī)學等多個領域，可滿足肝臟疾病機制、干細胞增殖分化、肝損傷修復、免疫調節(jié)、藥物篩選及細胞治療研發(fā)等多種科研場景需求，同時可用于與肝細胞、免疫細胞共培養(yǎng)，構建肝臟組織模型，研究細胞間相互作用及肝臟修復機制。
適用范圍與樣本（細胞）處理
本產(chǎn)品適用于肝臟疾病機制研究、肝間充質干細胞功能研究、干細胞誘導分化研究、藥物篩選與評價、細胞治療研發(fā)、共培養(yǎng)模型構建等場景；可用于肝纖維化、肝硬化、急性肝損傷等疾病的發(fā)病機制研究，探究肝間充質干細胞的增殖、遷移、凋亡、分化及信號通路調控機制；可用于肝間充質干細胞向肝細胞、膽管上皮細胞等方向的誘導分化研究，為肝臟再生醫(yī)學提供理論支撐；可用于抗肝纖維化、保肝、抗炎藥物的體外篩選與藥效評價，為藥物研發(fā)提供支撐；可用于細胞治療相關研究，評估肝間充質干細胞在肝臟損傷修復中的作用及應用潛力；可與肝細胞、免疫細胞共培養(yǎng)，構建肝臟組織三維模型，研究細胞間相互作用及肝臟免疫微環(huán)境調控機制。（具體培養(yǎng)步驟、細胞維護、誘導分化方案、實驗應用細節(jié)請參考產(chǎn)品說明書）
細胞處理與培養(yǎng)需嚴格遵循無菌操作規(guī)范，避免細胞污染；收到細胞后，立即置于37℃水浴鍋中快速解凍（1-2分鐘，嚴禁反復凍融），解凍后立即加入預熱至37℃的培養(yǎng)基（間充質干細胞專用基礎培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 專用生長添加劑）中，輕輕吹打混勻（動作輕柔，避免損傷細胞突起），4℃、300×g 離心5分鐘，棄上清液，用培養(yǎng)基重懸細胞后，接種至經(jīng)明膠或纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；培養(yǎng)24小時后更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細胞及細胞碎片，后續(xù)每2-3天更換一次培養(yǎng)液；細胞匯合度達70%-80%時進行傳代，傳代比例為1:2–1:3，傳代時采用溫和的細胞分離方式，輕輕吹打瓶底使貼壁細胞脫落，離心后重懸接種，避免損傷細胞；該細胞為原代干細胞，建議在P4代前完成核心實驗，以保證細胞的增殖能力及分化潛能穩(wěn)定；如需進行誘導分化實驗，可在細胞狀態(tài)良好時更換誘導培養(yǎng)基，按對應方案進行誘導；如需收集細胞或上清，可在細胞狀態(tài)良好時，用PBS漂洗后處理或直接收集培養(yǎng)上清，適配各類實驗需求。
儲存與注意事項
儲存條件
細胞凍存液（含10% DMSO、20% 胎牛血清及70% 間充質干細胞專用基礎培養(yǎng)基）需采用程序化降溫盒（-1℃/min）緩慢降溫，置于-80℃密封保存，長期儲存（超過6個月）建議轉移至液氮（-196℃）中保存，嚴禁反復凍融、劇烈震蕩，防止細胞破裂、活性喪失及分化潛能衰退；凍存細胞取出后需快速解凍，避免在-20℃~0℃區(qū)間停留過久，防止細胞損傷；未接種的凍存細胞需密封保存，做好標記（細胞名稱、凍存日期、批次、代次），避免混淆；培養(yǎng)基需置于2～8℃避光密封保存，避免反復凍融，使用前預熱至37℃，未用完的培養(yǎng)液需密封存放，建議1周內用完；培養(yǎng)相關試劑（DMSO、包被試劑、生長添加劑、誘導分化試劑等）需按對應要求儲存，確保試劑活性，實驗相關試劑需按需冷藏或冷凍保存，符合生物制品儲存的規(guī)范要求。
注意事項
1. 所有細胞操作需嚴格遵循無菌規(guī)范，實驗器具需提前高壓滅菌處理，接種、換液、傳代時更換吸嘴，避免交叉污染，影響細胞活性、表型及分化潛能；細胞培養(yǎng)過程中需保持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，避免溫度、CO?濃度波動，防止細胞脫壁或活性下降，同時避免劇烈震蕩，防止細胞突起損傷，契合干細胞培養(yǎng)的無菌操作與環(huán)境控制要求。
2. 細胞解凍、接種、傳代需嚴格遵循操作規(guī)范，避免反復凍融，否則會導致細胞破裂、活性喪失，影響培養(yǎng)效果及分化潛能；解凍時需快速均勻，接種后及時置于培養(yǎng)箱中，避免細胞長時間暴露在室溫下；操作過程中動作輕柔，避免吹打過度，防止損傷細胞突起，影響細胞間連接及生理功能，保障細胞活性、增殖能力及分化潛能穩(wěn)定。
3. 細胞培養(yǎng)過程中需定期觀察細胞狀態(tài)，若出現(xiàn)細胞貼壁不良、脫壁、形態(tài)異常（胞體皺縮、折光性差、突起消失、形態(tài)不規(guī)則）或污染（培養(yǎng)液渾濁、出現(xiàn)絮狀物）等情況，需及時處理；培養(yǎng)基需定期更換，避免營養(yǎng)耗盡及代謝廢物積累，同時可根據(jù)細胞生長狀態(tài)調整傳代比例，確保細胞處于對數(shù)生長期，維持干細胞表型及分化潛能穩(wěn)定，契合原代間充質干細胞的培養(yǎng)維護要點，建議定期檢測細胞表面標志物表達，監(jiān)測干細胞特性。
4. 實驗操作需嚴格遵循實驗室安全規(guī)范，妥善處理廢棄細胞、培養(yǎng)液及耗材，操作含DMSO的凍存液時需做好個人防護措施（佩戴手套、口罩、護目鏡），避免皮膚接觸和吸入；避免細胞接觸強氧化劑、重金屬離子及蛋白變性物質，防止干擾細胞活性、表型及分化潛能；培養(yǎng)期間可采用無菌檢測手段定期監(jiān)測細胞無菌狀態(tài)，確保細胞質量符合實驗及應用要求，契合生物實驗室安全與質量控制規(guī)范；進行誘導分化實驗時，需嚴格控制誘導條件，定期觀察分化狀態(tài)，確保誘導效果。
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