產(chǎn)品系統(tǒng)PRODUCT CENTER
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首頁(yè)-產(chǎn)品系統(tǒng)-細(xì)胞-細(xì)胞系-BY-0593ST豬睪丸細(xì)胞系


廠家實(shí)力
Manufacturer Strength
有效保修
Valid Warranty
質(zhì)量保障
Quality Assurance產(chǎn)品分類
PRODUCT CLASSIFICATION技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES
詳細(xì)介紹
來(lái)源與建立背景
形態(tài)與生長(zhǎng)特征
功能特性
病毒受體表達(dá):表達(dá)多種豬源病毒受體,如豬瘟病毒受體 CD46(陽(yáng)性率 90%)、口蹄疫病毒受體整合素 β1(陽(yáng)性率 85%),其受體表達(dá)譜覆蓋 80% 以上的常見(jiàn)豬源病毒,為廣譜病毒培養(yǎng)提供分子基礎(chǔ);與猴源細(xì)胞系相比,豬源特異性受體的同源性達(dá) 98%,更接近自然感染的受體結(jié)合狀態(tài)。
病毒敏感性譜:對(duì)豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬圓環(huán)病毒 2 型等 10 余種豬源病毒具有高度敏感性,豬瘟病毒感染后 48 小時(shí)出現(xiàn)典型細(xì)胞病變(顆粒增多、脫落),病毒滴度達(dá) 10? TCID??/mL;對(duì)口蹄疫病毒的支持能力優(yōu)于 Marc145 細(xì)胞,病毒增殖效率提升 30%,且能保持病毒的免疫原性。
代謝適應(yīng)性:具有強(qiáng)大的營(yíng)養(yǎng)代謝能力,在含 5% 血清的培養(yǎng)基中仍可正常生長(zhǎng),乳酸代謝速率是 Vero 細(xì)胞的 2 倍,適合低成本大規(guī)模培養(yǎng);同時(shí)能分泌多種細(xì)胞因子(如 IL-6、TNF-α),模擬體內(nèi)病毒感染后的免疫微環(huán)境。
豬源病毒研究與疫苗開(kāi)發(fā)
病毒分離與鑒定:作為基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室的shou選細(xì)胞系,ST 細(xì)胞可從豬糞便、口腔拭子等樣本中分離豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒等,分離率達(dá) 85%(顯著高于猴源細(xì)胞系的 60%),且能通過(guò)細(xì)胞病變形態(tài)初步區(qū)分病毒類型,為疫病快速診斷提供依據(jù)。2018 年我國(guó)非洲豬瘟疫情初期,該細(xì)胞系曾用于排除其他常見(jiàn)豬病毒感染。
疫苗生產(chǎn)與效力評(píng)價(jià):在豬瘟滅活疫苗生產(chǎn)中,ST 細(xì)胞的病毒產(chǎn)量達(dá) 10?.? PFU/mL,較原代豬腎細(xì)胞提升 15 倍,疫苗免疫仔豬后中和抗體效價(jià)達(dá) 1:128,保護(hù)率超 95%,且生產(chǎn)成本降低 50%,我國(guó)多數(shù)豬瘟疫苗生產(chǎn)企業(yè)采用該細(xì)胞系。
抗病du藥物篩選與診斷技術(shù)開(kāi)發(fā)
藥物篩選模型:基于其廣譜病毒敏感性,建立多病毒高通量篩選體系,日均可檢測(cè) 150 種化合物。通過(guò)該模型發(fā)現(xiàn)的中藥提取物對(duì)豬瘟病毒和口蹄疫病毒均有抑制作用,病毒滴度下降 100 倍以上,且對(duì)細(xì)胞毒性低,為復(fù)方抗病du藥物研發(fā)提供候選成分。
診斷試劑生產(chǎn):利用其高效表達(dá)病毒抗原的特性,制備多病毒聯(lián)檢 ELISA 試劑盒,可同時(shí)檢測(cè)豬瘟、口蹄疫等 5 種病毒抗體,靈敏度達(dá) 90%,特異性 92%,檢測(cè)時(shí)間縮短至 2 小時(shí),被廣泛用于規(guī)?;i場(chǎng)的疫病監(jiān)測(cè)。
病毒感染機(jī)制與跨物種傳播研究
受體結(jié)合機(jī)制:通過(guò) ST 細(xì)胞研究豬瘟病毒與 CD46 的相互作用,發(fā)現(xiàn)病毒 E2 蛋白的第 138 位氨基酸是結(jié)合關(guān)鍵位點(diǎn),突變后病毒感染力下降 90%,為受體阻斷劑設(shè)計(jì)提供靶點(diǎn)。
跨物種傳播模擬:將人源 ACE2 受體導(dǎo)入 ST 細(xì)胞,可構(gòu)建豬 - 人跨物種病毒傳播模型,用于評(píng)估豬流感病毒對(duì)人類的感染風(fēng)險(xiǎn),實(shí)驗(yàn)顯示 H1N1 豬流感病毒在該模型中的復(fù)制效率是普通 ST 細(xì)胞的 5 倍,與人類肺細(xì)胞的相關(guān)性達(dá) 80%。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基:DMEM 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 青mei素 - 鏈mei素,pH 維持在 7.2-7.4;大規(guī)模生產(chǎn)可采用無(wú)血清培養(yǎng)基(含重組生長(zhǎng)因子),病毒產(chǎn)量與含血清體系相當(dāng),且能減少外源蛋白污染。
傳代流程:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 70% 時(shí),消化處理后按 1:6 比例接種,離心速度 800rpm,24 小時(shí)貼壁率超 95%,避免過(guò)度融合(>80% 會(huì)導(dǎo)致成纖維細(xì)胞老化,病毒敏感性下降)。
凍存保護(hù):采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基,細(xì)胞密度 3×10?個(gè) /mL,程序降溫至 - 80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮,復(fù)蘇時(shí) 37℃水浴 2 分鐘,接種后 48 小時(shí)換液,存活率可達(dá) 90%,建議每 20 代凍存一次以保持活力。
病毒培養(yǎng)與檢測(cè)操作
豬瘟病毒培養(yǎng)優(yōu)化:細(xì)胞以 1×10?個(gè) / 孔接種 24 孔板,培養(yǎng) 24 小時(shí)后換含 2% 血清的維持液,加入病毒液(MOI=0.1),37℃吸附 2 小時(shí)后換液,72 小時(shí)后收集上清測(cè)滴度,TCID??法結(jié)果變異系數(shù)<6%。
多病毒鑒定方法:通過(guò)觀察細(xì)胞病變出現(xiàn)時(shí)間與形態(tài)差異初步區(qū)分病毒類型(豬瘟病毒 48-72 小時(shí)出現(xiàn)顆粒狀病變,口蹄疫病毒 24-48 小時(shí)出現(xiàn)融合性病變),結(jié)合間接免疫熒光試驗(yàn)可進(jìn)一步確認(rèn)病毒種類,準(zhǔn)確率達(dá) 90%。
優(yōu)勢(shì):
豬源特異性:作為豬源細(xì)胞系,其病毒受體與代謝特征更接近豬體內(nèi)環(huán)境,研究結(jié)果的臨床相關(guān)性顯著高于猴源細(xì)胞系,尤其適合豬源病毒的天然感染機(jī)制研究。
病毒譜廣泛:對(duì)多種豬源病毒具有敏感性,可同時(shí)支持 DNA 病毒與 RNA 病毒復(fù)制,減少實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞系的更換成本,適合基層實(shí)驗(yàn)室與多病毒研究場(chǎng)景。
培養(yǎng)成本低:適應(yīng)低血清甚至無(wú)血清培養(yǎng),倍增速度快,大規(guī)模培養(yǎng)成本僅為 Vero 細(xì)胞的 1/3,適合資源有限的實(shí)驗(yàn)室與企業(yè)使用。
局限性:
形態(tài)特征限制:成纖維樣形態(tài)導(dǎo)致部分病毒的細(xì)胞病變不典型(如豬圓環(huán)病毒),需結(jié)合分子生物學(xué)方法輔助鑒定。
功能單一性:缺乏特定組織細(xì)胞的分化功能,如無(wú)法模擬豬呼吸道上皮的纖毛擺動(dòng),對(duì)呼吸道病毒的研究適用性有限。
種屬限制:對(duì)人類病毒的支持能力弱,不適合跨物種病毒傳播的深入研究,需與人類細(xì)胞系配合使用。
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