Hela S3 HeLaS3人宮頸癌細(xì)胞系
Hela S3 HeLaS3人宮頸癌細(xì)胞系，源自1951年從人類宮頸腺癌組織分離建立的HeLa細(xì)胞系亞克隆，是目前科研領(lǐng)域應(yīng)用zui廣泛的永生性腫瘤細(xì)胞系之一。該細(xì)胞系經(jīng)體外長期傳代篩選、純化及多重鑒定，表達(dá)宮頸癌細(xì)胞特異性標(biāo)志物，通過嚴(yán)格無菌檢測(cè)（無支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染），具備穩(wěn)定的體外培養(yǎng)特性與典型的腫瘤細(xì)胞功能。作為經(jīng)典的宮頸癌細(xì)胞模型，其核心特征是擁有端粒酶活性，可實(shí)現(xiàn)無限增殖（打破正常細(xì)胞分裂極限），基因組存在異常（含76-80條染色體），能模擬體內(nèi)宮頸癌的生長、增殖、侵襲及耐藥相關(guān)特性，在宮頸癌發(fā)病機(jī)制、腫瘤增殖調(diào)控、抗腫瘤藥物篩選、基因編輯及疫苗研發(fā)等研究中具有不可替代的作用，適配免疫印跡、免疫熒光、Transwell、克隆形成實(shí)驗(yàn)、ELISA、流式細(xì)胞術(shù)等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、藥理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等科研領(lǐng)域，為宮頸癌基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化提供標(biāo)準(zhǔn)化、高活性的細(xì)胞模型[5]。
細(xì)胞特性
HeLa S3（HeLaS3）人宮頸癌細(xì)胞系具有明確的腫瘤細(xì)胞表型及穩(wěn)定生長特征，核心特性如下：細(xì)胞形態(tài)典型，呈上皮樣，多為多邊形或不規(guī)則圓形，嚴(yán)格貼壁生長，胞體飽滿、折光性強(qiáng)，排列緊密且無明顯極性，匯合后形成連續(xù)單層，符合上皮源性腫瘤細(xì)胞的典型形態(tài)特征；細(xì)胞特異性表達(dá)宮頸癌及上皮細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物（如CK8/18、CK19、E-cadherin、HPV相關(guān)抗原），經(jīng)免疫熒光、免疫印跡等方法驗(yàn)證，標(biāo)志物表達(dá)穩(wěn)定，可特異性區(qū)分于正常宮頸上皮細(xì)胞及其他部位腫瘤細(xì)胞；細(xì)胞純度≥95%，無雜細(xì)胞污染，無支原體、細(xì)菌、真菌及病毒污染，細(xì)胞活性≥90%，每瓶凍存細(xì)胞數(shù)≥1×10?個(gè)，可無限傳代培養(yǎng)，傳代過程中腫瘤表型、增殖能力、侵襲潛能及標(biāo)志物表達(dá)無明顯衰退，具備“永生性"生長特性；細(xì)胞增殖速度極快，倍增時(shí)間短（約24-36小時(shí)），對(duì)數(shù)生長期增殖活躍，無需額外誘導(dǎo)即可維持腫瘤細(xì)胞表型，可穩(wěn)定分泌腫瘤相關(guān)蛋白及促侵襲、促轉(zhuǎn)移因子；細(xì)胞為貼壁依賴性生長，適配常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系，無需特殊包被基質(zhì)，培養(yǎng)過程中可穩(wěn)定維持細(xì)胞表型與腫瘤相關(guān)功能，同時(shí)可耐受一定的藥物濃度，適合用于耐藥機(jī)制研究及藥物篩選實(shí)驗(yàn)；細(xì)胞遺傳背景清晰，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，是腫瘤學(xué)研究中zui常用的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系之一。
產(chǎn)品特點(diǎn)
本產(chǎn)品（HeLa S3人宮頸癌細(xì)胞系）具有活性高、純度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、增殖快、適用性廣、操作便捷等核心特點(diǎn)，同時(shí)兼具永生性腫瘤細(xì)胞系的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。細(xì)胞經(jīng)嚴(yán)格傳代篩選、純化及多指標(biāo)質(zhì)檢，純度≥95%，活性≥90%，細(xì)胞形態(tài)完整、增殖能力強(qiáng)，可直接用于實(shí)驗(yàn)，無需額外純化或誘導(dǎo)，降低實(shí)驗(yàn)門檻；細(xì)胞特異性ji強(qiáng)，保留HeLa細(xì)胞系的經(jīng)典腫瘤特性，精準(zhǔn)模擬體內(nèi)宮頸癌的生長、增殖及侵襲狀態(tài)，基因組穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，區(qū)別于其他宮頸癌細(xì)胞系，保障實(shí)驗(yàn)的特異性與準(zhǔn)確性，契合宮頸癌基礎(chǔ)研究與藥物研發(fā)的核心需求；細(xì)胞生理功能穩(wěn)定，可無限傳代培養(yǎng)，傳代過程中腫瘤表型、增殖能力、侵襲潛能及標(biāo)志物表達(dá)保持穩(wěn)定，能穩(wěn)定提供高活性腫瘤細(xì)胞模型，保障實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的重復(fù)性與可靠性；適配常規(guī)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)體系，培養(yǎng)條件溫和（37℃、5%CO?），操作流程簡潔，無需復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)備，適配各類生物實(shí)驗(yàn)室及腫瘤研究機(jī)構(gòu)使用；細(xì)胞無支原體、細(xì)菌、真菌污染，質(zhì)檢嚴(yán)格，可直接用于后續(xù)腫瘤機(jī)制研究、藥物篩選、標(biāo)志物檢測(cè)、侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)、基因編輯等各類實(shí)驗(yàn)，減少實(shí)驗(yàn)污染風(fēng)險(xiǎn)，保障實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行；適用范圍覆蓋腫瘤學(xué)、藥理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，可滿足宮頸癌發(fā)病機(jī)制、腫瘤增殖與凋亡調(diào)控、耐藥機(jī)制、侵襲轉(zhuǎn)移、抗腫瘤藥物篩選及療效評(píng)價(jià)、基因功能研究等多種科研場景需求，同時(shí)可用于與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)，評(píng)估腫瘤免疫應(yīng)答及免yi治療效果，契合腫瘤研究的多元化需求。
適用范圍與樣本（細(xì)胞）處理
本產(chǎn)品適用于宮頸癌發(fā)病機(jī)制研究、腫瘤增殖與凋亡調(diào)控研究、抗腫瘤藥物篩選及療效評(píng)價(jià)、宮頸癌相關(guān)標(biāo)志物檢測(cè)、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥機(jī)制研究、基因編輯與疫苗研發(fā)、腫瘤免疫研究等場景；可用于大規(guī)模培養(yǎng)獲取細(xì)胞及細(xì)胞上清，用于宮頸癌相關(guān)蛋白、細(xì)胞因子的檢測(cè)與純化；可用于免疫熒光、免疫印跡、ELISA、Transwell、劃痕實(shí)驗(yàn)、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、基因轉(zhuǎn)染等多種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，檢測(cè)宮頸癌標(biāo)志物表達(dá)、評(píng)估細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移能力、克隆形成能力、篩選抗腫瘤藥物及驗(yàn)證基因功能；可用于體外構(gòu)建宮頸癌模型，探究宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，為宮頸癌臨床診療及藥物研發(fā)提供理論支撐；可作為工具細(xì)胞，用于抗腫瘤藥物的高通量篩選、藥效評(píng)價(jià)、作用機(jī)制分析，輔助藥物研發(fā)與質(zhì)量控制，同時(shí)可用于小兒麻痹癥疫苗、流感疫苗等相關(guān)研發(fā)實(shí)驗(yàn)，契合腫瘤藥物研發(fā)與疫苗研發(fā)的規(guī)范要求。（具體培養(yǎng)步驟、細(xì)胞維護(hù)、實(shí)驗(yàn)應(yīng)用細(xì)節(jié)請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書）
細(xì)胞處理與培養(yǎng)需嚴(yán)格遵循無菌操作規(guī)范，避免細(xì)胞污染；收到細(xì)胞后，立即置于37℃水浴鍋中快速解凍（1分鐘內(nèi)，嚴(yán)禁反復(fù)凍融，水浴時(shí)凍存管管口高于水面，避免水流入管內(nèi)），解凍后立即按培養(yǎng)基:凍存液≥10:1的比例，加入預(yù)熱至37℃的培養(yǎng)基（腫瘤細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10% 胎牛血清 + 專用生長添加劑）中，輕輕吹打混勻（動(dòng)作輕柔，避免損傷細(xì)胞），4℃、300×g 離心5分鐘，棄上清液（去除DMSO，降低細(xì)胞毒性），用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，接種至培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；培養(yǎng)24小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基，去除未貼壁的死細(xì)胞及細(xì)胞碎片，新恢復(fù)的細(xì)胞粘附尚不牢固，24小時(shí)內(nèi)避免頻繁觀察和更換培養(yǎng)基，后續(xù)每2-3天更換一次培養(yǎng)液；細(xì)胞匯合度達(dá)80%-90%時(shí)進(jìn)行傳代（適配細(xì)胞快速增殖的特點(diǎn)），傳代比例為1:3–1:5，傳代時(shí)輕輕吹打瓶底使貼壁細(xì)胞脫落，離心后重懸接種，傳代過程中可采用溫和的細(xì)胞分離方式，避免損傷細(xì)胞；該細(xì)胞可無限傳代培養(yǎng)，傳代過程中需維持對(duì)數(shù)生長期，確保腫瘤表型、增殖能力及侵襲潛能穩(wěn)定；如需收集細(xì)胞或上清，可在細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，用PBS漂洗后處理或直接收集培養(yǎng)上清，適配各類實(shí)驗(yàn)需求。
儲(chǔ)存與注意事項(xiàng)
儲(chǔ)存條件
細(xì)胞凍存液（含10% DMSO、20% 胎牛血清及70% 腫瘤細(xì)胞專用基礎(chǔ)培養(yǎng)基）需采用程序化降溫盒（-1℃/min）緩慢降溫，置于-80℃密封保存，長期儲(chǔ)存（超過6個(gè)月）建議轉(zhuǎn)移至液氮（-196℃）中保存，理論上可無限期保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融、劇烈震蕩，防止細(xì)胞破裂、活性喪失及腫瘤表型改變；凍存細(xì)胞取出后需快速解凍，避免在-20℃~0℃區(qū)間停留過久，防止細(xì)胞損傷，若未立即復(fù)蘇，需在干冰上暫時(shí)保存；未接種的凍存細(xì)胞需密封保存，做好標(biāo)記（細(xì)胞名稱、凍存日期、批次），避免混淆；培養(yǎng)基需置于2～8℃避光密封保存，避免反復(fù)凍融，使用前預(yù)熱至37℃，未用完的培養(yǎng)液需密封存放，建議1周內(nèi)用完；培養(yǎng)相關(guān)試劑（DMSO、生長添加劑等）需按對(duì)應(yīng)要求儲(chǔ)存，DMSO需嚴(yán)格避光保存，凍存液現(xiàn)配現(xiàn)用，配好后4℃可暫存1周、-20℃最多保存1個(gè)月，避免反復(fù)凍融，確保試劑活性，實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑需按需冷藏或冷凍保存，符合生物制品儲(chǔ)存的規(guī)范要求[2]。
注意事項(xiàng)
1. 所有細(xì)胞操作需嚴(yán)格遵循無菌規(guī)范，實(shí)驗(yàn)器具需提前高壓滅菌處理，接種、換液、傳代時(shí)更換吸嘴，避免交叉污染，影響細(xì)胞活性及腫瘤表型；細(xì)胞培養(yǎng)過程中需保持培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定，避免溫度、CO?濃度波動(dòng)，防止細(xì)胞脫壁或活性下降，同時(shí)避免劇烈震蕩，防止細(xì)胞損傷，契合細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作與環(huán)境控制要求；水浴鍋中的無菌水需定期更換，降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
2. 細(xì)胞解凍、接種、傳代需嚴(yán)格遵循操作規(guī)范，遵循“慢凍快融"原則，避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂、活性喪失，影響培養(yǎng)效果及腫瘤表型；解凍時(shí)需快速均勻，建議在可見冰融化但樣品仍冰冷（約0℃）時(shí)從水浴鍋中取出，升溫至室溫會(huì)增加冷凍保護(hù)劑的細(xì)胞毒性；接種后及時(shí)置于培養(yǎng)箱中，避免細(xì)胞長時(shí)間暴露在室溫下；操作過程中動(dòng)作輕柔，避免吹打過度，防止損傷細(xì)胞，影響增殖及腫瘤相關(guān)功能，保障細(xì)胞活性與腫瘤表型穩(wěn)定。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)過程中需定期觀察細(xì)胞狀態(tài)，若出現(xiàn)細(xì)胞貼壁不良、脫壁、形態(tài)異常（胞體皺縮、折光性差、排列異常紊亂）或污染（培養(yǎng)液渾濁、出現(xiàn)絮狀物）等情況，需及時(shí)處理；培養(yǎng)基需定期更換，避免營養(yǎng)耗盡及代謝廢物積累，同時(shí)可根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)調(diào)整傳代比例（適配細(xì)胞快速增殖特點(diǎn)），確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長期，維持腫瘤表型穩(wěn)定，契合HeLa S3細(xì)胞的培養(yǎng)維護(hù)要點(diǎn)；細(xì)胞凍存后，建議取出一管進(jìn)行復(fù)蘇，檢測(cè)細(xì)胞存活率，凍存半年后可再次復(fù)蘇觀察，確保細(xì)胞狀態(tài)良好。
4. 實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)范，從液氮中取細(xì)胞時(shí)需佩戴護(hù)目鏡和手套，謹(jǐn)防凍傷及凍存管爆炸；妥善處理廢棄細(xì)胞、培養(yǎng)液及耗材，操作含DMSO的凍存液時(shí)需做好個(gè)人防護(hù)措施（佩戴手套、口罩、護(hù)目鏡），避免皮膚接觸和吸入；避免細(xì)胞接觸強(qiáng)氧化劑、重金屬離子及蛋白變性物質(zhì)，防止干擾細(xì)胞活性及腫瘤表型；培養(yǎng)期間可采用無菌檢測(cè)手段定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞無菌狀態(tài)，確保細(xì)胞質(zhì)量符合實(shí)驗(yàn)及應(yīng)用要求，契合生物實(shí)驗(yàn)室安全與質(zhì)量控制規(guī)范；細(xì)胞培養(yǎng)需使用其特定適應(yīng)的培養(yǎng)基，避免驟然更換培養(yǎng)條件，防止細(xì)胞形態(tài)改變或死亡。
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