線粒體膜電位（MMP）：

使用幾種染料中的其中一種就可以檢測到細(xì)胞在凋亡過程中MMP的降低，如雙氰基-雙己氧基羰基靛藍(lán)，它能夠隱藏在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)。當(dāng)MMP體系崩潰時(shí)，細(xì)胞的熒光就會減少。

磷脂酰絲氨酸（PS）在細(xì)胞表面的分布情況：

PS一般分布在質(zhì)膜的內(nèi)側(cè)上。在細(xì)胞凋亡過程中，PS殘余物會曝露在細(xì)胞表面。這種變化可以通過復(fù)合蛋白鈣依賴的磷脂結(jié)合蛋白V與PS結(jié)合來進(jìn)行檢測。所使用的細(xì)胞必須是未經(jīng)修復(fù)的，因?yàn)殁}低速的磷脂結(jié)合蛋白V不能到達(dá)完整細(xì)胞的內(nèi)部。PI常被用來加到二次壞死細(xì)胞中來進(jìn)行鑒別。

DNA消化：

在的細(xì)胞凋亡的一系列反應(yīng)過程中，一種特異的內(nèi)切核酸酶能夠?qū)⑷旧w這間的連接點(diǎn)打斷，形成大量的小片段，這些小的片段是一些低聚體，其大小約為180bp?？梢酝ㄟ^以下兩種方法對DNA鏈的斷裂進(jìn)行檢測：觀察DNA柱狀圖的sub-G1頂點(diǎn)；用脫氧核糖核苷末端轉(zhuǎn)移酶對DNA鏈的斷口進(jìn)行標(biāo)記（TUNEL檢測）。

Sub-G1點(diǎn)：

如果細(xì)胞在乙醇中固定，隨后再水合時(shí)，一部分低分子量的DNA會被濾掉，以降低DNA的含量。這些細(xì)胞會在DNA柱狀圖中作為獨(dú)立的峰被觀察到。

TUNEL檢測：

DNA鏈的斷裂末端可以通過酶標(biāo)記作用進(jìn)行標(biāo)記。在70%乙醇中固定之前，細(xì)胞在1%多聚甲醛中固定以將小的片段結(jié)合到細(xì)胞中去，然后和Tdt以及一種已標(biāo)記的核苷一起進(jìn)行培育。所用的這些核苷包括：地高辛－dUTP，用經(jīng)FITC標(biāo)記的抗地高辛配基進(jìn)行檢測；生物素－dUTP，用經(jīng)FITC標(biāo)記的抗生素蛋白進(jìn)行檢測；溴－dUTP，用抗BrdUrd的FITC進(jìn)行檢測。

在加入PI標(biāo)記DNA后，綠（FITC）與紅（PI）相對的熒光能夠進(jìn)行記錄。凋亡的細(xì)胞會發(fā)出綠色的熒光，經(jīng)染色過的DNA表明從凋亡的細(xì)胞中的細(xì)胞循環(huán)間隔會被誘導(dǎo)產(chǎn)生。

細(xì)胞生長及死亡：

組織的發(fā)育和腫瘤的生長在細(xì)胞分裂和死亡的平衡是同樣的。在許多細(xì)胞動力學(xué)研究中，它們具有同樣重要的地位。細(xì)胞儀和部分多功能流式細(xì)胞儀在程序上給予新的視覺。

細(xì)胞生長：

細(xì)胞增殖可以通過研究來進(jìn)行檢測：細(xì)胞周期；細(xì)胞通過細(xì)胞周期的運(yùn)動率；細(xì)胞周期相關(guān)蛋白；長期標(biāo)記物的稀釋

DNA圖示：

細(xì)胞通過用DNA結(jié)合染料進(jìn)行染色，如PI。DNA圖示：能夠作出對細(xì)胞在細(xì)胞周期G1/G2，S和G2/M階段的產(chǎn)量的評估；不能很好地提供有關(guān)細(xì)胞通過細(xì)胞周期的運(yùn)動信息；能夠較易地進(jìn)行免疫熒光結(jié)合染色；應(yīng)一直作為很多研究領(lǐng)域中的檢測方法。

細(xì)胞周期中的細(xì)胞運(yùn)動率：

這里提供兩種常用的檢測方法：在細(xì)胞用BrdUrd和PI標(biāo)記的抗體標(biāo)記后，再經(jīng)溴代脫氧尿苷（BrdUrd）進(jìn)行脈沖標(biāo)記。接著用Hoechst 332588、PI和二苯甲酰胺標(biāo)記DNA方法用BrdUrd對細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。

用BrdUrd進(jìn)行脈沖標(biāo)記：

經(jīng)脈沖標(biāo)記后，細(xì)胞在S期就包含有BrdUrd。通過細(xì)胞周期的細(xì)胞運(yùn)動可以通過以下方法進(jìn)行檢測。分析方法如下：動態(tài)的，在那些細(xì)胞周期進(jìn)程中可以觀測得到；更復(fù)雜，因?yàn)樵诤涂贵w一起培育之前必須將DNA變性；因而很難結(jié)合另外的抗體標(biāo)記；可以用來對動物腫瘤進(jìn)行細(xì)胞動力學(xué)研究。

BrdUrd/Hoechst/PI法：

在紫外線的激發(fā)下，結(jié)合到DNA上的Hoechst 332588會發(fā)出藍(lán)色的熒光。這種染料會優(yōu)先結(jié)合到DNA上的富AT區(qū)域，它的熒光會被BrdUrd淬滅。PI散發(fā)出的熒光可以幫助鑒別細(xì)胞周期的各個(gè)階段；藍(lán)色熒光可以檢測BrdUrd在細(xì)胞中的含量以及其在S期中存在的時(shí)間。這種方法是：動態(tài)的；簡化的；需紫外儀，但并不適用于所有的流式細(xì)胞儀；在需要兩種激光的情況下，很難與免疫熒光染料結(jié)合。

細(xì)胞周期相關(guān)蛋白：

在細(xì)胞周期過程中，有幾種蛋白質(zhì)家庭對細(xì)胞周期的進(jìn)程進(jìn)行控制。如果有一個(gè)合適的抗體存在時(shí)，它們的細(xì)胞周期分布將能夠被檢測出來。

穩(wěn)定標(biāo)記物的梯度變化：

這里有幾種熒光復(fù)合物可以對細(xì)胞蛋白進(jìn)行穩(wěn)定的標(biāo)記，如雙乙酸基羰基熒光素，琥珀脂。當(dāng)細(xì)胞分裂時(shí)，標(biāo)記物會被分配到兩個(gè)子細(xì)胞中去。一些細(xì)胞如淋巴細(xì)胞會精密地分配標(biāo)記物。目前只能追蹤到大約5次的細(xì)胞分裂。人工培養(yǎng)的細(xì)胞通常會對標(biāo)記物有一個(gè)寬的分配和對分裂的細(xì)胞個(gè)體之間加以區(qū)別以做便更好地定義。這種方法不能對細(xì)胞周期的間期進(jìn)程提供更多的信息。

壞死：

壞死通常被定義為細(xì)胞膜的完整性的破壞。一些結(jié)合有染料的DNA會被活細(xì)胞釋放出來，但卻會被死細(xì)胞吸收。另外的染料會被活細(xì)胞所保留但在死細(xì)胞中會丟失，如羰基熒光素。因此，染料的結(jié)合常被用來檢測死細(xì)胞的數(shù)量。

凋亡：

流式細(xì)胞儀可以追蹤細(xì)胞在調(diào)亡過程的一系列反應(yīng)過程中的許多不同的組分。一些部分重要的檢測會在下面被提及。

流式檢測細(xì)胞周期要點(diǎn)： zui關(guān)鍵的就是減少細(xì)胞碎片和單細(xì)胞懸液的制備！ 

1、細(xì)胞消化要理想，資料顯示消化時(shí)加EDTA，可使流式做的很漂亮； 

2、細(xì)胞消化后不可吹打過度，減少細(xì)胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的細(xì)胞容易破碎； 

3、 細(xì)胞用PBS洗滌離心，轉(zhuǎn)速不超過1000r/min，有文獻(xiàn)用800r/min；可考慮在此過程中用300目的尼龍網(wǎng)過濾一遍細(xì)胞（有人主張用鋼網(wǎng)，以 減少細(xì)胞與尼龍網(wǎng)粘連的損失，本人認(rèn)為鋼網(wǎng)易損傷細(xì)胞，DNA外溢也會造成細(xì)胞粘連，所以在細(xì)胞數(shù)足夠的情況下，尼龍網(wǎng)）； 

4、離心后的固定，標(biāo)準(zhǔn)做法是將細(xì)胞懸液加入預(yù)冷70％酒精，而不是向細(xì)胞中加酒精，這樣是為了減少細(xì)胞聚集，這一點(diǎn)很重要，很多人都忽視了！ 5、一般選擇4℃固定到第二天； 

6、加染液前的洗滌仍要注意離心轉(zhuǎn)速的問題； 

7、 關(guān)于PI染液的組成及配方，應(yīng)主要以文獻(xiàn)為主，PI（作用為DNA染色劑）的濃度從0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都見報(bào)道，響應(yīng)的 求助顯示都可出良好結(jié)果，RNAs酶（由于PI也可染RNA，故要去除RNA）一般濃度為50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主 要是通透細(xì)胞膜使PI能進(jìn)入細(xì)胞核。 8、檢測時(shí)細(xì)胞要達(dá)到1～2×106個(gè)細(xì)胞（實(shí)際檢測是1萬到2萬個(gè)細(xì)胞），為了既保持初始條件相同，又可搜集到足夠的細(xì)胞，應(yīng)選用多孔培養(yǎng)板，在搜集細(xì)胞時(shí)，濃度大、抑制強(qiáng)的組可多搜集些孔，以保證檢測的細(xì)胞數(shù)量。如果細(xì)胞數(shù)量太低，技師為了減少對流式細(xì)胞儀 的損傷，就會選擇高速流（一般的檢測用低速流，誤差?。?，檢測的質(zhì)量就會大大下降，數(shù)據(jù)的說服力就下降了！